Сущность обследования ПЦР в реальном времени

Сегодня ДНК-анализы активно используются с целью диагностирования инфекций и могут выявить даже единичных возбудителей. Самый известный способ исследования ДНК #8212; полимеразная цепная реакция. Сегодня в медицинской практике активно внедряется новый метод #8212; ПЦР в реальном времени. Суть его заключается в наблюдении и численной оценке накапливания продуктов полимеразной цепной реакции при автоматической фиксации и расшифровке результатов.

Применение этого метода анализа исключает стадию электрофореза. Это дает возможность предотвратить ложноположительные результаты и существенно сократить время для получения результата. ПЦР в реальном времени дает возможность исследовать материал за 20-60 минут и обнаружить даже одну молекулу дезоксирибонуклеиновой кислоты в пробе.

Анализ ПРЦ: сущность обследования и его принципы

Полимеразный метод цепной реакции создал Кэри Мюллис в 1983 г. За свое изобретение, ставшее одним из самых выдающихся в конце 20 века в сфере молекулярной биологии, он удостоился Нобелевской премии по химии (1993).

Принцип анализа методом ПЦР real time базируется на выявлении в биоматериале малой части ДНК провокатора подозреваемой инфекции. Дезоксирибонуклеиновая кислота состоит из множества оснований, поэтому для распознавания заболевания хватит минимального фрагмента молекулы. В период проведения ПЦР-анализа выискивается такой элемент ДНК, который характерен только для конкретного возбудителя инфекции.

Полимеразная цепная реакция непосредственно применяется с целью, чтобы обнаруженный фрагмент расплодить. К концу исследования фрагментов должно накопиться не меньше 1012.

Преимущества ПЦР в реальном времени:

  • высокая достоверность анализа;
  • определение численности фрагментов ДНК в материале;
  • минимальный риск получения ошибочного результата при диагностике;
  • короткий срок осуществления ПЦР анализа;
  • возможность обнаружения нескольких возбудителей одновременно;
  • фиксация процедуры и результатов в электронном виде.

Инфекции, выявляемые с помощью ПЦР-диагностики

В реальном времени ПЦР используется в медицинской практике для определения вирусной, бактериальной нагрузки (количества агентов), для установления числа внутриклеточных возбудителей инфекций, для анализа результативности лечения, для выявления устойчивости к лекарственным препаратам.

Заболевания, которые можно выявить с помощью ПЦР:

  • ВИЧ-инфекция;
  • инфекции, которые передаются половым путем;
  • вирусные гепатиты;
  • папилломавирус человека;
  • мононуклеоз;
  • цитомегаловирусная инфекция;
  • герпес;
  • туберкулез;
  • клещевой энцефалит;
  • кандидоз;
  • хеликобактерная инфекция.

Материал для сдачи ПЦР-анализа

Противопоказаний для данного исследования нет #8212; все могут проводить ПЦР. Для изучения берут биоматериал человека:

  • соскоб клеток эпителия (из уретры у мужчин, из половых путей у женщин);
  • кровь и ее компоненты;
  • жидкости (плевры, суставов и др.);
  • слизь;
  • слюна;
  • моча;
  • мазок спермы у мужчин.

Материал помещают в амплификатор #8212; прибор для ПЦР реал тайм.

Подготовка к ПЦР-анализу

Точность результатов, которые дает ПЦР диагностика, в большей степени зависит от соблюдения человеком рекомендаций по подготовке к анализу. Перед исследованием нужно придерживаться таких рекомендаций:

  1. За 10 дней до проб нужно прервать прием антибактериальных препаратов и терапевтические процедуры (если это не противоречит рекомендациям врача). Мужчинам не желательно мочиться за 4-5 часов до осуществления процедуры ПЦР в реальном виде.
  2. Полимеразная цепная реакция у женщин проводится до месячных или спустя 1-4 дня после их окончания.
  3. Перед забором крови нельзя есть и пить.
  4. Моча собирается утром в стерильную емкость.

Непосредственно перед сдачей анализа:

  1. Не проводить туалет половых органов с помощью антибактериальных средств.
  2. Не мочиться минимум за 3 часа до ПЦР анализа.
  3. Исключить спринцевание женщинам, не применять вагинальные свечи.
  4. Положительный исход диагностики зависит также от чистоты материала #8212; очень важно исключить его контаминацию, которая ставит под сомнение достоверность результата.
  5. Рекомендуется приходить на обследование в период обострения заболевания. Если был незащищенный половой акт, должно пройти минимум 3 недели, прежде чем может проводиться диагностика.

Как берут анализ ПЦР real time?

Существуют определенные стандартные правила сбора биологического материала. Образцы материала берут в процедурном кабинете с помощью специального стерильного одноразового инструмента. После этого образцы помещаются в стерильные пробирки, которые перед этим обрабатываются хромовой смесью и подвергаются воздействию высокой температуры.

Венозная кровь собирается на голодный желудок. Перед исследованием необходимо исключить употребление жирной и аллергенной пищи. Для сбора мочи необходимо помыть половые органы чистой водой, собрать мочу в стерильную емкость и отнести в лабораторию. Если берется мазок из влагалища, врач использует специальный инструмент, когда пациентка располагается на гинекологическом кресле. Соскоб у мужчин берут из внешней части уретры. Когда материал взят, пробу направляют на исследование.

Расшифровка результатов ПЦР

Итоговый результат будет готов через сутки после сбора биоматериала. Иногда полимеразная цепная реакция может дать результат через час. Если в исходном материале не выявлено следов молекул возбудителей инфекций, то считается, что анализ ПЦР отрицательный.

Если выявлены следы инфекции в диагностируемом биоматериале, то результат положительный. Он свидетельствует о присутствии возбудителя в момент времени, когда сдавалась проба. Бывает, что полимеразная цепная реакция дает положительный результат, но нет видимых симптомов заболевания, то есть человек является носителем инфекции без демонстрации клинических признаков. В этом случае лечение не требуется, но необходимо постоянное наблюдение специалиста.

Инфекция от носителя может передаваться здоровому человеку. Также болезнь может переходить в хроническую форму. Если анализ дает положительный результат в крови, то это подтверждает факт, что человек уже не является носителем, и требуется лечение. Для каждого конкретного носителя инфекции количественный результат ПЦР может оценить врач индивидуально.

Расшифровка анализа дает возможность определить меру активности заболевания и его стадию. Этот фактор влияет на дозу назначенных препаратов, на курс лечения.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени практически не дает ложноположительного результата, когда при отсутствии инфекции диагностика дает положительную пробу. Ложный результат ПЦР отрицательный прослеживается редко. Обычно это связано с тем, что в данный момент отсутствует активность инфекции.

На сегодняшний день полимеразная цепная реакция в реальном времени #8212; одно из самых безошибочных исследований. Но при подозрении на любое заболевание не обязательно прибегать только к этому виду исследования. Есть определенная группа инфекций, для которых предпочтительны другие методы. Для каждого конкретного случая следует проконсультироваться со специалистом.

Возможно Вас заинтересуют Реклама на сайте ✆

Количественное определение вируса Гепатита С методом ПЦР в режиме реального времени

Определение вируса гепатита С методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР) отличается высокой чувствительностью и специфичностью (98%). Принцип ПЦР заключается в идентификации уникального фрагмента РНК, принадлежащего вирусу, после многократного удвоения исследуемого генетического материала в пробирке.

В сети КДЛ «ОЛИМП» ПЦР-исследования выполняются в режиме REAL-TIME – это означает, что после каждого аппаратного цикла (амлификации) происходит измерение количества РНК в биоматериале. Данная процедура сводит вероятность ложноположительного результата практически к нулю! Такая точность позволяет выставить диагноз гепатита С.

Количественный метод отображает вирусную нагрузку, то есть меру тяжести гепатита, путем указания количества вирусных частиц в крови пациента. Прежде всего, анализ необходим в нескольких случаях: при положительном качественном («положительно») выявлении вируса гепатита С, а также для мониторинга эффективности противовирусной терапии и определения тактики лечения.

Вирусная нагрузка измеряется в Международных Единицах на миллилитр крови. Меньше 1 млн – считается низкой, свыше – высокой. Чувствительность анализатора составляет 300 МЕ/мл, если количество меньше данной цифры – то это считается «отрицательным» результатом.

Показания к назначению

Обнаружение РНК вируса гепатита С в плазме крови методом ПЦР;

Определение вирусной нагрузки ВГС;

Оценка эффективности лечения и определение тактики противовирусной терапии.

Результат выдается в виде количества вирусных частиц. Пример: «1,7*10 в 6ст. МЕ/мл », так как 1 МЕ = 4 вирусным копиям гепатита С. то 1,7 х 4 = 6,8. Результат означает, что вирусная нагрузка равна 6 800 000 копий вируса в 1 мл плазмы крови.

1 МЕ = 4 вирусным копиям гепатита С.

Результат меньше 300 МЕ/мл – считается отрицательным.

Обнаружение вируса Гепатита С методом ПЦР в режиме реального времени

Определение вируса гепатита С методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР) отличается высокой чувствительностью и специфичностью (98%). Принцип ПЦР заключается в идентификации уникального фрагмента РНК, принадлежащего вирусу, после многократного удвоения исследуемого генетического материала в пробирке.

В сети КДЛ «ОЛИМП» ПЦР-исследования выполняются в режиме REAL-TIME – это означает, что после каждого аппаратного цикла (амлификации) происходит измерение количества РНК в биоматериале. Данная процедура сводит вероятность ложноположительного результата практически к нулю! Такая точность позволяет выставить диагноз гепатита С.

Качественные анализы не отображают количество возбудителя в биоматериале, следовательно, результат выдается «положительно» или «отрицательно». Более информативным (но и дорогим) является количественный метод, который показывает вирусную нагрузку.

Исследования более наукоемкое и затратное в сравнении с ЭХЛ методом, что не позволяет использовать методику в качестве скринингового обследования. Таким образом, чаще всего анализ назначается в случае положительного результата ЭХЛ-методики (см. «Anti-HCV »), чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз. ПЦР-метод способен обнаружить РНК вируса уже через 2 недели после инфицирования, то есть намного раньше, чем появляются антитела к вирусу.

Показания к назначению

Профилактическое обследование лиц, входящих в группу риска, по ВОЗ:

- люди, получившие кровь, продукты крови или органы до проведения скрининга на вирус гепатита С или там, где скрининг еще не получил надлежащего распространения;

- нынешние или бывшие потребители инъекционных наркотиков (даже те, кто вводил инъекционный наркотик один раз много лет назад);

- пациенты, длительное время получающие процедуры гемодиализа;

- люди с отклоняющимися от нормы результатами тестов печени или болезнью печени;

- дети грудного возраста, рожденные инфицированными матерями.

Положительный результат анализа Anti-HCV (выявление антител к вирусу гепатита С);

Диагностика гепатита С;

Определение этиологии гепатита;

Контроль эффективности лечения гепатита С;

Определение стадии активной репликации вируса (при хроническом гепатите С), для определения эффективной тактики лечения.

Источники: http://101analiz.ru/dnk-diagnostika/pcr-v-realnom-vremeni.html, http://test.alfalab.org/services/kolichestvennoe-opredelenie-virusa-gepatita-s-metodom-pcr-v-rezhime-realnogo-vremeni, http://www.kdlolymp.kz/ru/services/obnaruzhenie-virusa-gepatita-s-metodom-pcr-v-rezhime-realnogo-vremeni






Комментариев пока нет!

Поделитесь своим мнением