ИФА в диагностике вирусных гепатитов. Возможности иммуноферментного анализа

Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов основывается на применении иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследований. Основными иммунохимическими методами являются радиоизотопный или радиоиммунный (РИА) и иммуноферментный (ИФА). В основе иммунохимических методов диагностики лежит специфическое взаимодействие антиген — антитело с последующим выявлением комплекса при помощи специальных меток. Наиболее распространенным является иммуноферментный анализ.

Первые сообщения о применении иммуноферментного анализа. как метода для определения каких-либо веществ были опубликованы в 1971 году одновременно двумя исследовательскими группами — В. Van Weemen, A. Schuurs и Е. Engvall, P. Perlmann. В основе иммуноферментного анализа лежит следующий принцип: на твердой фазе, в качестве которой используется, главным образом, поверхность лунок полистиролового планшета, фиксируется антиген возбудителя инфекции или антитела (часто смесь антител) к антигенам, которые необходимо обнаружить. Этот антиген или антитела, которые зафиксированы на твердой фазе, называются иммуносорбентом.

В результате инкубации иммуносорбента и испытуемой сыворотки при наличии определяемого агента происходит их связывание в комплекс антиген — антитело. После процедуры промывки, в ходе которой удаляются несвязанные антигены и антитела, проводится инкубация с конъюгатом. В качестве конъюгата при детекции HBsAg используют анти-HBs, при детекции антител к вирусу гепатита С —антитела к иммуноглобулинам человека (антивидовой конъюгат), меченные пероксидазой хрена. В итоге этой инкубации происходит присоединение к уже имеющимся комплексам антиген — антитело дополнительно внесенного конъюгата. После удаления несвязавшегося конъюгата (отмывки) в лунки вносится субстрат. При использовании пероксидазного конъюгата в качестве субстрата используют перекись водорода в сочетании с индикатором, в качестве которого наиболее часто применяют ортофенилендиамин (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ). Результат оценивается фотометрически.

Качество и надежность аналитических возможностей иммуноферментного метода характеризуются рядом критериев, к числу которых относятся чувствительность, специфичность, правильность и воспроизводимость.

Чувствительность — то минимальное количество вещества, которое может быть обнаружено при помощи иммуноферментного анализа. При этом нижним пределом чувствительности данного метода является концентрация исследуемого вещества в образце, которая соответствует наименьшему положительному результату определения, статистически достоверно отличающемуся от показателей заведомо отрицательных образцов. Чувствительность ИФТС зависит от ряда обстоятельств, связанных как с конструкцией тест-системы (аффинность иммуносорбента, качества экстракционных и буферных систем), так и разрешающей способностью и точностью метода регистрации.

Специфичность — способность выявлять именно те компоненты, для определения которых предназначена данная иммуноферментная тест-система. Специфичность ИФА определяется во многом перекрестной реакцией антител или антигенов (то есть композиции, используемой в качестве иммуносорбента), с близкородственными соединениями, а также составом инкубационной среды (матрикс-эффект).

Правильность — соответствие среднего значения результатов повторных определений одного и того же контрольного образца с истинной величиной измеряемого параметра. Правильность определения в ИФА зависит от качества самой тест-системы и контрольного образца. Для хороших иммуноферментных тест-систем показатели правильности лежат в пределах 90-110 %. Особенностью медико-биологических исследований в ИФА является невозможность установления точной величины, и поэтому за истинную величину принимается средняя от нескольких экспертных лабораторий. Статистическим критерием правильности служит средняя арифметическая и степень ее отклонения от истинного значения, выраженная в процентах.

Воспроизводимость — способность тест-системы показывать одни и те же значения при повторных исследованиях одного и того же образца. Воспроизводимость зависит как от случайных погрешностей (ошибок) при проведении процедуры постановки реакции, так и от качества тест-систем и точности метода регистрации результатов. Считается, что воспроизводимость одних и тех же контрольных образцов одной фирмы в разных лабораториях не должна превышать величину коэффициента вариации в 15%.

Существует несколько специфических схем ИФА для определения маркеров вирусных гепатитов: а) прямой иммуноферментный анализ; б) непрямой иммуноферментный анализ; в) конкурентное ингибирование; в) «ловушеч-ный», или «capture» метод.

Из молекулярно-биологических методов диагностики вирусных гепатитов чаще используются полимеразная цепная реакция и гибридизация. Эти методы, особенно ПЦР, позволяют выявлять очень малые количества специфической вирусной ДНК или РНК и, таким образом, судить о репликации, а в ряде случаев и об активности репликации.

Гепатит С: положительный ИФА+повторный и отрицательный ПЦР?

Здравствуйте!
Беременность 14 недель.
Анализ на гепатит С в поликлинике - положительный. Повторный - тоже положительный. Самих данных на руках нет, все в карточке. Как я поняла, использовался метод ИФА.
ПЦР гепатит С - не обнаружен (сдали с мужем в независимой лаборатории, пока ждала результатов повторного анализа).
У мужа ПЦР гепатит С - не обнаружен.
Биохимия крови (март ) - хорошая (со слов инфекциониста, результаты в карточке).
Биохимия пол года назад (сдавала по другому поводу):
АлАТ 14,82 (норма 5-40 Е/л)
АсАТ 17,46 (-//-)
Билирубин 13,11 (норма 8,55 - 20,52 мкмоль/л)
Не знаю, что еще важно в биохимическом анализе крови для диагностики гепатита С.

Хотела бы спросить у специалистов:
1. У меня гепатит С?

2. Есть ли необходимость сдавать анализ методом ИФА в другой лаборатории для подтверждения или две ошибки подряд быть не может?

3. Нужно ли мужу сдавать анализ методом ИФА?

4. Инфекционист сказала, что повторный положительный является основанием для постановки на учет с гепатитом С. ПЦР отрицательный значит, что вирус пока неактивен. Я на приеме растерялась и не спросила: пока - это значит, что в любое время может активизироваться?

5. Есть ли риск заразить ребенка?

Здравствуйте!
Беременность 35 недель.
Вскоре после предыдущего сообщения сдали с мужем кровь на анализ методом ИФА (не в поликлинике, в одной из независимых лабораторий):
ИФА-диагностика anti HCV - отрицательно
ИФА-диагностика (муж) anti HCV - отрицательно .
В поликлинике меня направили на повторный анализ в 25 недель беременности:
анализ на гепатит С в поликлинике - положительный (там тоже наличие антител определяют, как я поняла, не ПЦР).
На 33 неделе снова сдала кровь на анализ в другой независимой лаборатории. Результаты:
Иммунохимия: антитела к гепатиту С - 0.43 (диапазон нормы: до 0.9 отрицательный. от 0.9 до 1.0 серая зона, от 1.0 положительный)
ПЦР, РНК вируса гепатита С (качественный метод) - не обнаружено .
Да, еще кровь на биохимию каждый месяц сдаю - все хорошо (со слов доктора).
В моей обменной карте записано, что я носитель вирусного гепатита С. У этого диагноза есть последствия: трудно получить разрешение рожать в другом РД, кроме того, где меня обязаны принять; ну и там обсервация, конечно.

Как Вы считаете, учитывая новые данные,

1) носитель ли я вирусного гепатита С?

2) если нет, то могу ли я настаивать на том, чтобы эту запись из обменки убрали, или инфекционист не может опираться на данные других лабораторий, кроме той, в которую поликлиника отправляет материалы (что-то же там плюсует!)?

Здравствуйте! Я снова к Вам за советом.
Инфекционист в поликлинике диагноз не сняла, аргументируя тем, что не может игнорировать три положительных результата ИФА. Согласилась только дать направление в городской центр инфекционной гепатологии на базе инфекционной больницы (кстати, оказалось, что именно в лабораторию инфекционной больницы и направляют материалы из нашей поликлиники). В консультативном заключении специалиста Центра в графе диагноз записано, что убедительных данных за хронический вирусный гепатит С на момент осмотра нет, возможен вариант постинфекции . При этом снять диагноз данный специалист тоже не может, потому что три положительных результата и на их реактивы пока никто не жаловался, а рекомендует снятие с учета у инфекциониста только после 3-х последовательных отрицательных результатов обследований на anti HCV (я так поняла, что имеются в виду результаты именно их лаборатории). Получается, что теперь я должна доказать, что у меня нет заболевания, за наличие которого у меня нет убедительных данных!

Подскажите, пожалуйста, есть ли документ, регламентирующий постановку и снятие диагноза при вирусном гепатите С, а также (даже - особенно) постановку на учет и снятие с этого учета? Неужели действительно три отрицательных ИФА?

Я понимаю, что состоять на учете - это не страшно, а в моем случае, по-моему, вообще ничего не значит. Я просто хочу успеть убрать запись носитель вирусного гепатита С из обменной карты, чтобы была возможность выбрать РД по желанию. Можете ли Вы что-нибудь посоветовать?

P.S. Еще было рекомендовано не кормить ребенка грудью после появления у него зубов ))

Как правильно сдавать кровь на гепатиты

В медицинском центре МедЭлит Вы сможете пройти точную диагностику вирусных гепатитов, дающую надежный и достоверный результат. Это стало возможным благодаря новым принципам ведения гепатитов и достижениям нашей лабораторной системы. Высокое качество лабораторной диагностики является одним из главных врачебных принципов клиники МедЭлит. Анализы, проводимые нами, позволяют ответить на следующие группы вопросов:

  • Если вирус гепатита в крови или контакт с ним закончился полным выздоровлением: определение наличия или отсутствия вируса методом ПЦР.
  • Если вирус все же есть, то как высока его концентрация (вирусная нагрузка) и насколько легко он поддастся противовирусной терапии (генотип вируса).
  • Насколько активен гепатит (ряд биохимических показателей крови)
  • Как далеко зашло поражение печени: успел ли сформироваться печеночный фиброз и какова его стадия.
  • Генетическое тестирование: определение генотипа Вашего организма в отношении вероятности избавления организма от вируса.

ИФА – определение маркеров вирусных гепатитов

ИФА означает «иммуноферментный анализ». На внедрение любого микроорганизма иммунная система человека вырабатывает специальные белки крови — антитела. Они специфичны, то есть подходят к каждому микробу, а точнее к антигену микроба (его опознавательному знаку), как ключ к замку. Иммуноферментные анализы на гепатиты и другие инфекции основаны на реакции антиген—антитело, в результате которой в сыворотке крови обнаруживаются либо антитела (с помощью стандартных антигенов), либо антигены (с помощью стандартных антител) микроба.

Чувствительность этих анализов у нас приближается к 100% поскольку они делаются с использованием самого современного оборудования и высококачественных реактивов. Ниже приводится перечень анализов на различные формы вирусных гепатитов методом ИФА, которые можно сделать в нашем медицинском центре.

Вирус гепатита A (HAV)

Ультрачувствительный тест на вирусы гепатитов В и С

На сегодняшний день наша клиника располагает самым высокоточным методом обнаружения и подтверждения вирусоносительства HCV, HBV. Это - полимеразная цепная реакция (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Теперь мы можем точно ответить: есть инфекция или ее нет, причем даже в тех случаях, когда стандартные методы ПЦР-диагностики бессильны.

ПЦР-диагностика гепатита ультрачувствительным методом показана:

  • для выявления скрытых (латентных) форм вирусных гепатитов В и С,
  • при наличии в крови антител к вирусам гепатита В или С, но неподтвержденном стандартными видами ПЦР-диагностики,
  • для оценки эффективности проводимой противовирусной терапии в процессе лечения и через 24 недели после окончания лечения.
  • для раннего выявления острых вирусных гепатитов В и С у лиц, контактировавших с зараженным человеком

Биохимические показатели крови

Вирусы гепатитов могут в той или иной степени нарушать функции печени. В зависимости от вида и степени нарушения этих функций может коренным образом изменяться и лечение гепатита.

На основании показателей клинического и биохимического анализов крови мы определяем, есть или нет нарушение функции Вашей печени. Если есть, то каков вид этого нарушения и насколько оно выражено. В нашем центре Вам не придется долго ждать результатов исследований. Сроки выполнения анализов ограничены только технологией их выполнения. Результаты данной группы анализов, как правило, становятся известными либо в день забора крови, либо на следующий день (в зависимости от времени взятия материала). Точность анализов не вызывает сомнений.

Иммунный статус организма

Вирусные гепатиты почти всегда сопровождаются нарушениями в иммунной системе. Своевременная и правильная диагностика и коррекция иммунных нарушений – это тот базис, без которого невозможно полноценное лечение хронических гепатитов. Анализы показателей иммунного статуса в нашей клинике проводятся на самом высоком технологическом уровне, а их сложной трактовкой в совершенстве владеют наши врачи. Показатели Вашего иммунитета будут быстро и точно определены и правильно интерпретированы.

Оставить комментарий

Вы должны Войти. чтобы оставить комментарий.

Об авторе

Несколько слов об авторе.

Источники: http://meduniver.com/Medical/zabolevania_pecheni/ifa_v_diagnostike_gepatita.html, http://forums.rusmedserv.com/showthread.php?t=19, http://luchshijlekar.ru/kak-zhit-s-gepatitom/kak-pravilno-sdavat-krov-na-gepatity.html






Комментариев пока нет!

Поделитесь своим мнением

Сумма цифр: код подтверждения