Преимущества анализов ПЦР

Анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция) – наиболее современный и точный метод лабораторной диагностики многих инфекций. За открытие данного метода исследований американский ученый Кэрри Мюллис в 1993 году был награжден Нобелевской премией. Использование анализа ПЦР на инфекции применимо как для бактериальных, так и для вирусных заболеваний. При этом данное исследование способно диагностировать болезни в острой, хронической формах и малоизвестные заболевания. Что же собой представляет ПЦР-диагностика и когда она применяется?

Метод полимеразной цепной реакции

Метод анализа ПЦР на инфекции заключается в идентифицировании возбудителей инфекционных заболеваний на основе определения их генетического материала (РНК или ДНК) в пробах, полученных от пациента.

В ходе исследования в специальный реактор помещают образец биологического материала (кровь, выделения, мазок), в котором предположительно могут быть ДНК микроорганизмов. К образцу материала добавляют специальные ферменты. Эти ферменты имеют способность связываться с ДНК микроорганизма и синтезировать его копию. Реакция синтезирования копии ДНК протекает по принципу цепной реакции. На первом ее этапе из одной молекулы ДНК формируются две новые молекулы. На втором этапе из этих двух молекул формируются четыре новые, и так далее. После нескольких циклов реакции из одной копии ДНК образуются несколько сотен или тысяч копий. Большое количество копий ДНК микроорганизма легко проанализировать и сравнить с базой данных, в которой содержится информация о строении ДНК разных возбудителей.

Анализ ПЦР на инфекции применяется для диагностики многих возбудителей, в том числе возбудителей «скрытых» инфекций, которые характеризуются бессимптомным протеканием. В большинстве лабораторий проводят исследования данным методом на следующие инфекции:

  • хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
  • гепатиты В, С;
  • микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
  • уреаплазмоз мочеполовой системы;
  • кандидоз половых органов;
  • трихомониаз;
  • туберкулез;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • герпесная инфекция;
  • ВИЧ (СПИД);
  • папилломавирусная инфекция;
  • хеликобактериоз.

Специалисты указывают на многие преимущества анализа методом ПЦР.

1. Прямое диагностирование наличия возбудителя. Большинство традиционных методов диагностики выявляют белки-маркеры, которые являются продуктами жизнедеятельности микроорганизмов. Это является всего лишь свидетельством о наличии инфекции. Метод ПЦР прямо указывает на присутствие конкретного возбудителя инфекционного заболевания в организме.

2. Высокий уровень специфичности. Метод ПЦР обладает высокой специфичностью благодаря тому, что в исследуемом образце материала выявляют уникальный фрагмент ДНК, который характерен только для определенного возбудителя. Это предупреждает получение ложных результатов.

3. Высокая чувствительность анализа методом ПЦР. Данный метод исследования дает возможность выявить даже единичные клетки вирусов или бактерий. Определение количества возбудителей особенно важно в случае выявления условно-патогенных микроорганизмов, которые становятся патологическими только при увеличении их количества.

4. Возможность диагностировать несколько возбудителей в одной пробе материала. Сходство химического состава нуклеиновых кислот, входящих в ДНК или РНК возбудителей, позволяет применять данный метод для идентификации разных инфекций.

5. Возможность выявления скрытых и хронических инфекций. Кроме того, анализ методомПЦР очень эффективен в отношении микроорганизмов с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.

6. Высокая скорость проведения анализа методом ПЦР.

Расшифровка анализа ПЦР обычно формулируется обозначениями «отрицательный результат» или «положительный результат».

Положительный результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что в образце материала исследования были определены следы инфекции. Таким образом, данный результат указывает на присутствие в организме той или иной инфекции.

Отрицательный результат анализа ПЦР означает, что в образце биологического материала исследования не было выявлено следов инфекции. Отрицательный результат в большинстве случаев указывает, что в организме нет инфекции, которую пытались обнаружить данным методом анализа.

Анализ ПЦР на гепатит С

Анализ ПЦР на гепатит С – лабораторное исследование крови, с помощью которого выявляют генетический материал (частицу РНК) вируса гепатита С. Частицу РНК вируса гепатита С можно определить данным методом качественно и количественно.

Качественный анализ свидетельствует о присутствии вируса гепатита С в крови пациента. Данное исследование проводят тем пациентам, в крови которых найдены антитела к гепатиту С. В расшифровке анализа ПЦР на гепатит С может быть указано: «обнаружено» или «не обнаружено». Нормой считается запись «не обнаружено». Результат «обнаружено» может указывать на то, что вирус размножается в организме и постоянно инфицирует клетки печени. Качественный анализ по данному методу обладает определенной чувствительностью (10–500 МЕ/мл). При проведении ПЦР-диагностики у больных с низкой концентрацией вируса (проходящих противовирусное лечение) желательно применять диагностическую систему, имеющую чувствительность не менее 50 МЕ/мл.

Количественный анализ ПЦР на гепатит С (вирусная нагрузка) – исследование на концентрацию вируса в крови. Вирусной нагрузкой называют количество единиц вирусной РНК, которое присутствует в некотором объеме крови (обычно в 1 мл, 1 см 3 ). В расшифровке анализа ПЦР это количество обозначают в цифрах, единицы измерения - МЕ/мл.

Чем выше вирусная нагрузка у человека, тем больший риск передачи инфекции вертикальным путем или при половых контактах. Кроме того, высокая вирусная нагрузка значительно затрудняет проведение противовирусной терапии.

Согласно расшифровке анализа ПЦР на гепатит С, высокой считается нагрузка выше 800 000 МЕ/мл или 800. 10 3. Вирусная нагрузка больше 1. 10 7 – очень высокая.

Анализ ПЦР на хламидии

Хламидии – это внутриклеточные паразиты, которые занимают промежуточное положение между риккетсиями (бактериями) и вирусами. Данная инфекция поражает слизистые ткани половых путей, дыхательных путей, конъюнктиву.

Возбудитель урогенитального хламидиоза – хламидия Chl. Trachomatis очень трудно обнаруживается из-за своей двойственной природы. Метод анализа ПЦР на хламидии обладает достаточной чувствительностью для качественного определения данного возбудителя и диагностирования наличия острой стадии болезни. Материалом для анализа ПЦР на хламидии является осадок мочи, сперма, секрет простаты или соскобы из уретры и конъюнктивы.

Результат анализа ПЦР может быть отрицательным или положительным. В случае отрицательного анализа в бланке обычно указывается, что Chl. Trachomatis не обнаружена, инфицирование отсутствует, острый период заболевания отсутствует. При положительном результате анализа ПЦР, в бланке результата указывают: хламидиоз, который вызван Chl. Trachomatis, острый период первичного заражения или реактивация инфекции.

База знаний: HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×10 2 – 1,0×10 8 копий/мл образца .

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой). У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

  • Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
  • Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите С.
  • При микст-гепатитах.
  • При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Что означают результаты?

  • Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 40 МЕ/мл).
  • копий/мл ( МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Низкая виремия (наиболее благоприятный прогноз течения заболевания и эффективности терапии).
  • 2*10^6 копий/мл (8*10^5 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Высокая виремия.
  • 1,0*10^8 копий/мл (2,4*10^7 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (1,8*10^2 – 2,4*10^7 МЕ/мл).

Что может влиять на результат?

Недостоверный результат может быть получен при:

  • загрязнении биоматериала;
  • наличии в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР;
  • присутствии в крови гепарина.
  • Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
  • При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.

Кто назначает исследование?

  • Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. - К. Здоровье, 2000. – Т.1. 600-690.
  • Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. - М.:ООО МИА, 2006. – 471-476 с.
  • Harrison's Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

Анализ ПЦР

Благодаря современным методам диагностики специалисты имеют возможность определять широкий спектр возбудителей различных инфекций, что гарантирует в дальнейшем быстрое и эффективное лечение болезни. Одним из уникальных методов выявления инфекции в организме является анализ ПЦР, позволяющий определить не только тип инфекционного возбудителя, но также и количественное присутствие его в организме. Что собой представляет анализ ПЦР, и какие инфекции могут определяться с его помощью?

Что такое анализ ПЦР?

Анализ методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод определения различных инфекций высокой точности. Для проведения анализа методом ПЦР используется генетический материал, а именно ДНК или РНК, которые присутствуют в пробах, взятых на анализ.

Для проведения анализа, в зависимости от типа определяемого заболевания, может использоваться биологический материал разного типа, включая кровь, выделения из половых органов, мазок из зева и пр.

Исследуемый материал для анализа ПРЦ помещается в специальный реактор, куда также добавляют ферменты, способные связывать ДНК микроба и создают его копию. В результате нескольких проведенных циклов полученного материала ДНК микроба становится достаточно для того, чтобы определить возбудителя инфекции с высокой точностью. Анализ методом ПЦР позволяет также оценивать эффективность лечения многих хронических инфекций.

Какие заболевания можно определить с помощью анализа на инфекции ПЦР?

Анализ на инфекции ПЦР позволяет диагностировать множество инфекций, причем по результатам анализа ПЦР можно определить и степень распространения инфекции, что очень важно для правильного назначения лечения. Анализ ПЦР назначается для определения возбудителей следующих заболеваний:

  • гепатит В и С, выявляется путем обнаружения в биологическом материале ДНК соответствующего вируса;
  • хламидиоз, выявляется путем обнаружения ДНК Chlamydia trachomatis;
  • уреаплазмоз, выявляется путем обнаружения ДНК Ureaplasma urealiticum и Ureaplasma parvum;
  • микоплазмоз, выявляется путем обнаружения ДНК Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium;
  • кандидоз, выявляется путем обнаружения ДНК Candida albicans;
  • бактериальный вагиноз, выявляется путем обнаружения ДНК Gardnerella vaginalis;
  • трихомониаз, выявляется путем обнаружения ДНК Trichomonas vaginalis;
  • инфекционный мононуклеоз, выявляется путем обнаружения ДНК вируса Эпшетейна-Барра;
  • туберкулез, выявляется путем обнаружения ДНК микобактерии туберкулеза;
  • папилломавирусная инфекция, выявляется путем обнаружения ДНК вируса папилломы человека;
  • ВИЧ (СПИД), выявляется путем обнаружения ДНК вируса иммунодефицита человека;
  • герпесная инфекция, выявляется путем обнаружения ДНК вирусов простого герпеса 1 и 2 типов;
  • хеликобактериоз, выявляется путем обнаружения ДНК Helicobacter pylori.

Анализ ПЦР на гепатит С

Анализ ПЦР на гепатит С позволяет точно определить наличие вируса в крови, из чего делается заключение о наличии данного заболевания у пациента. Сегодня это один из наиболее эффективных методов определения гепатита С. Анализ ПЦР на гепатит С может быть качественным и количественным.

Качественный анализ на гепатит С прямо указывает на наличие вируса в крови пациента. Качественным результатом анализа ПЦР в данном случае может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Данный вид теста имеет определенную чувствительность, в пределах 10-500 МЕ/мл. Это означает, что если концентрация вируса в крови будет ниже, то результатом качественного анализа будет «не обнаружено».

Количественный анализ ПЦР на гепатит С позволяет определить концентрацию вируса в крови. Данный показатель обозначают как «вирусная нагрузка», и он представляет собой количество единиц вирусной РНК, обнаруженной в определенном объеме крови. Расшифровка анализа ПЦР в данном случае может выражаться по-разному. В некоторых лабораториях будет указано, например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. Также могут использоваться и другие единицы изменения #8212; копии/мл. Пересчитать копии в международные единицы (МЕ) можно по формуле: 1 МЕ/мл = 4 копии/мл.

Для определения степени распространения вируса в организме, можно принять следующие показатели. Если в расшифровке анализа ПЦР присутствует значение вирусной нагрузки в 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, то это говорит о высоком содержании вируса в крови. Очень высокой считается нагрузка, значение которой превышает 1*10 7 ME/мл.

Анализ ПЦР на хламидии

Для проведения анализа ПЦР на хламидии используется биологический материал в виде соскобов из уретры, осадка мочи, секрета простаты, спермы, соскобов с конъюнктивы. Анализ ПЦР на хламидии подразумевает качественное определение присутствия возбудителя инфекции в материале. Расшифровка анализов ПЦР на хламидии может свидетельствовать о наличии инфекции либо об ее отсутствии. Нормальный результат анализа ПЦР на хламидии должен быть отрицательным. Положительный результат свидетельствует о наличии инфекции в острой стадии заболевания.

Для того чтобы результат анализа ПЦР был достоверным, исследуемым пациентам рекомендуется в течение 3-х дней до сдачи биоматериала воздерживаться от применения любых лекарств, а также от применения средств гигиены, в которых содержатся бактерицидные добавки. Кроме того, до сдачи анализа необходимо воздерживаться от опорожнения мочевого пузыря в течение 2-х часов.

Метод ПЦР на страже здоровья

Сегодня анализ методом ПЦР позволяет ставить точные диагнозы там, где другие анализы дают неточную картину заболевания. На сегодняшний день это самый быстрый и, главное, самый точный метод диагностики. Метод хорош тем, что позволяет находить различных по своей природе возбудителей в разном биологическом материале. При этом точность выявления не страдает от того, на наличие какого именно возбудителя проводится исследование. В расшифровке анализа ПЦР содержится достаточно информации о том, какая инфекция и в каком количестве присутствует в организме.

Источники: http://ymadam.net/zdorove/sdaem-analizy/analiz-ptsr.php, http://www.helix.ru/kb/item/542, http://www.wjtoday.ru/analiz-pcr/






Комментариев пока нет!

Поделитесь своим мнением